组织切片制备技术发展至今已有上百年历史，作为组织学及发育生物学研究最重要的基本制样技术，在整个生命科学的发展中都扮演重要角色。今天，可克达拉蔡司君就来带大家一起了解一下虽然历史悠久，但是至今都使用最多，应用最广的石蜡切片。

　　作为*早使用的包埋剂之一，石蜡能够长久保存且对材料提供良好的支撑，有效的避免切片形变，同时，由于其质地柔软粘连，能够以蜡带的形式轻松制作连续切片，这是其它切片技术难以做到的。

　　石蜡切片的制备相对繁琐，包括固定，脱水，包埋，切片，染色，封片，我们详细展开来看：

　　固定

　　活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会慢慢腐败自溶。因此，在切下组织块后，需将其快速置于预先配制好的固定液中以保存其组织形态。FAA是常用的混合固定液，由70%酒精，冰醋酸，福尔马林以90：5：5混合配制而成，收缩少，穿透快，24小时内就能完成固定。

　　脱水

　　材料固定好后就需要脱水，脱水的目的是为了能将组织中的水置换为能与石蜡互溶的有机溶剂，这个过程需要温和渐进，一般采用先75%-乙醇梯度后再20%-二甲苯梯度脱水的方法以确保材料不发生强烈形变。

　　包埋

　　向已经脱水透明好的样品中少量多次加入碎蜡，使其在37℃下形成完全饱和的石蜡-二甲苯溶液，再将样品置于60℃液态的50%-石蜡中以确保石蜡充分渗透样品，随后放入包埋盒中以不高于60℃的石蜡包埋。

　　切片

　　在开始切片前，需提前准备好涂有蛋清甘油或多聚赖氨酸的黏附载玻片。将包埋好的蜡块置于切片机上，以2-10μm的厚度切片。切成的蜡带放在滴有水的玻片上，蜡带会由水的表面张力而均匀展开，也可以使用水槽捞片来让切片更加平整。吸去多余的水后，置于烘片机上37℃烘干。

　　染色封片

　　石蜡会妨碍染料进入组织，需要用二甲苯浸泡将蜡脱掉，再-0%梯度乙醇复水。之后按照不同染料的染色方法，对切片进行染色。

　　▲ HE染色，Masson三色法等复染色法都是病理学研究中的常用方法，利用不同结构对染料亲和性的不同对组织进行差异化染色。而像天狼星红这样的染料则是能够增强胶原纤维的双折射性，可使其在偏光观察下呈现不同的状态。

　　染色完成后需再次进行30%乙醇-二甲苯梯度脱水，最后使用中性树胶封片，完全固化后就能观察拍照了。当然也可以使用商业化的封片剂，如果需要油镜观察则应尽量选择折射率在1.5左右的封片剂。

　　观察与拍摄

　　当我们完成切片的制备之后，应该尽快完成观察和成像，以防止放置时间过长导致切片出现干裂，开胶等问题，影响我们的实验结果。

　　根据染料不同，我们可以选择明场，偏光或者荧光的观察方式进行拍摄，蔡司为切片数字化提供不同解决方案，比如研究级的蔡司Axio Imager系列正置显微镜就是采集切片数据的上佳之选。

　　✓ 高分辨复消色差的物镜配合无限远光学校正系统，力求更大限度校正像差;

　　✓ 蔡司特有镀膜技术为荧光滤片和镜头组提供接近的透光率，能降低光损失，提供出色的图像对比度。

　　当然，如果我们需要对大量切片进行数据采集时，一台可克达拉蔡司显微镜Axioscan 7全自动玻片扫描系统(点击查看)就能够解放我们的双手。

　　✓ 搭载明场，偏光，荧光三种成像模式，无论是何种染色方式的切片都能够完美兼容;

　　✓ 整机全封闭机体更大程度确保了光路的稳定性;

　　✓ 其100片的单次上样容量，快速荧光滤片转轮提供了快速高通量的扫描体验;

　　✓ 全新设计的自动校准光路以及高端Peltier冷却相机确保了Axioscan 7始终清晰锐利的图像质量和理想的色彩还原，是切片数字化的不二之选。

　　以上就是常规石蜡切片的制备方法，除常规化学染色外，该技术也常常用于制备免疫荧光切片，后续我们也会为您带来详细的介绍。